技術(shù)平臺(tái):
以TurboID技術(shù)平臺(tái)為例,該技術(shù)平臺(tái)在目的蛋白末端融合了突變型生物素連接酶。在過(guò)表達(dá)細(xì)胞中,加入生物素刺激,在10min之內(nèi),即可迅速對(duì)目的蛋白的相互作用蛋白進(jìn)行生物素化標(biāo)記。這一標(biāo)記過(guò)程不僅速度快,背景低,甚至在室溫條件下也能順利進(jìn)行。因此,TurboID技術(shù)平臺(tái)極大地拓展了其應(yīng)用范圍,不僅適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞體系,還可應(yīng)用于植物、昆蟲等多種生物體系。隨后,通過(guò)分離富集生物素標(biāo)記的蛋白質(zhì)并進(jìn)行酶切處理,可以輕松獲得肽段樣品,進(jìn)而用于質(zhì)譜分析,從而深入研究蛋白質(zhì)的相互作用及其功能。
服務(wù)內(nèi)容:
技術(shù)優(yōu)勢(shì):
① 催化效率高。
② 不會(huì)對(duì)活細(xì)胞造成損害。
③ 較高的生物素化效率和穩(wěn)定性。
④ 可以在室溫(25°C)下實(shí)現(xiàn)有效的生物素化。
應(yīng)用案例:
項(xiàng)目需求:分析給藥處理前后,細(xì)胞中與目的蛋白(POI)相互作用蛋白組的變化。
解決方案:利用鄰近標(biāo)記策略,構(gòu)建POI-TurboID表達(dá)載體,在細(xì)胞中過(guò)表達(dá),分別設(shè)置給藥組與空白組,生物素化標(biāo)記。將細(xì)胞中蛋白組進(jìn)行富集后,定性與定量分析生物素化蛋白的差異,以表征POI相互作用蛋白組的變化。
數(shù)據(jù)展示: